Специальные методы

Протонодвижущая сила

Протонодвижущую силу считают одним из основных средств преобразования и переноса энергии в биологических системах.
Харольд и Альтендорф указывают, что хороший индикатор Агр должен «быстро диффундировать через мембрану… быть полностью диссоциированным при физиологических значениях рН, не нарушать процессов метаболизма и не подвергаться транслокации системами биологического транспорта». Этим требованиям может удовлетворять К+ в клетках, обработанных 1—10 мкМ валиномицином с целью сделать мембрану проницаемой для этого иона. Поскольку мембранный потенциал у бактериальных клеток обычно составляет около 180 мВ с отрицательным полюсом внутри, концентрация калия в цитоплазме клеток, обработанных читать полностью »

Транспорт

Методика анализа

Подготовка клеток

Для изучения скоростей транспорта растворенных веществ нужно иметь возможность быстро отделять клетки от среды, в которой они суспендированы. Обычно это делают путем фильтрации через мембранные фильтры, поэтому лучше использовать разбавленные суспензии. Для фильтрации проб объемом 1 мл через фильтр диаметром 25 мм обычно приходится готовить клеточную суспензию, содержащую менее 200 мкг сухого вещества в 1 мл.
Как и при определении проницаемости, при изучении транспорта необходимо уделять большое внимание контролю условий выращивания и сбора клеток. При исследовании процессов транспорта очень важен выбор сред для отмывания и суспендирования, так как клетки в разбавленных суспензиях более чувствительны к читать полностью »

Проницаемость

Методика измерения

Проникновение растворенного вещества в бактериальные клетки или клеточные структуры чаще всего измеряют с помощью объемного метода или метода концентрированной взвеси, описанного Конвэем и Дауни и модифицированного Митчеллом и Мойлом, Мак-Дональдом и Герхардтом и другими. В этом случае используют обычно большие массы клеток — 3 г и больше (влажных клеток) на пробирку. Получение такого количества клеток может представлять проблему, однако не слишком сложную при использовании обычных лабораторных культур. Методы, требующие меньшего количества клеток и основанные на применении мембранных фильтров или мини-центрифуги, описаны в разделе о транспорте. В любом случае следует уделять внимание деталям, касающимся выращивания и сбора клеток, так как проницаемость бактерий может сильно изменяться в течение цикла развития периодической культуры или в результате отмывания клеток от читать полностью »